Таблица 1. Лизирующие буферы, используемые для экстракции тотального протеома из споровой взвеси B. anthracis.
|
№ п/п |
Реактив |
Конечная концентрация в растворе |
Количество на 100 мл раствора |
|
1 |
Трис основной |
40 мM |
0.4846 г |
|
2 |
DTT |
10 мM |
0.15425 г |
|
3 |
Triton X-100 |
2% |
2 мл |
|
4 |
Глицерин |
10% |
10 мл |
|
5* |
Коктейль ингибиторов бактериальных протеаз |
1 мкг/мл |
6 мкл |
|
6 |
Гуанидина хлорид |
6 М |
70.856 г |
|
7 |
Мочевина |
8 М |
48.048 г |
|
8 |
Тиомочевина |
2 М |
15.224 г |
Примечание.Компоненты 1-5 использовали при приготовлении обоих буферов, п. 6 используется при приготовлении лизирующего буфера с 6 М гуанидин хлоридом, п.п. 7 и 8 – лизирующего буфера с 8 М мочевиной/2 М тиомочевиной. * Коктейль ингибиторов бактериальных протеаз добавляли непосредственно перед началом работы. pH лизирующего буфера с мочевиной/тиомочевиной составлял 8.5-9.0. pH лизирующего буфера с гуанидин тиоцианатом – 7.5-8.0.