Исследование специфичности взаимодействия антител к рекомбинантной реналазе
##plugins.themes.bootstrap3.article.main##
Аннотация
Реналаза (RNLS) – полифункциональный белок, которому свойственны разные функции внутри и вне клеток. Об уровне RNLS в тканях и биологических жидкостях обычно судят при помощи коммерчески доступных антител, которые обладают различной специфичностью по отношению к целевому белку. В данной работе методом Вестерн блот анализа мы исследовали взаимодействие ряда первичных поликлональных и моноклональных антиреналазных антител с рекомбинантными препаратами RNLS человека и крысы, а также с химерными белками, в которых последовательности RNLS, кодируемые альтернативными экзонами (9 и 10), были слиты с дегидрофолатредуктазой. Для проверки специфичности взаимодействия использовали препараты лактатдегидрогеназ (LDHA и LDHB), для которых недавно обнаружено взаимодействие с некоторыми препаратами антиреналазных антител. Все исследованные поликлональные и моноклональные антитела эффективно взаимодействовали со всеми исследованными препаратами RNLS, включая фрагменты, полученные после обработки полноразмерного рекомбинантного белка протеазами, а также фрагменты, входящие в состав слитого с дигидрофолатредуктазой химерного белка. Препараты LDHA и LDHB также реагировали с антиреналазными антителами, и неспецифическое взаимодействие этих антител с LDHA и LDHB можно было существенно снизить за счет разведения (1:10000 вместо 1:1000, рекомендуемых производителями). При этом поликлональные антитела более эффективно взаимодействовали с полноразмерной рекомбинантной реналазой, а моноклональные антитела более эффективно взаимодействовали с пептидными фрагментами, полученными после обработки целевого белка протеазами (трипсином, химотрипсином и химазой).
##plugins.themes.bootstrap3.article.details##
Библиографические ссылки
- Xu, J., Li, G., Wang, P., Velazquez, H., Yao, X., Li, Y., Wu, Y., Peixoto, A., Crowley, S., & Desir, G. V. (2005). Renalase is a novel, soluble monoamine oxidase that regulates cardiac function and blood pressure. J. Clin. Invest., 115(5), 1275–1280. DOI
- Severina, I. S., Fedchenko, V. I., Veselovsky, A. V., & Medvedev, A. E. (2015). The history of renalase from amine oxidase to a α-NAD(P)H-oxidase/ anomerase. Biomeditsinskaya Khimiya, 61(6), 667-679. DOI
- Moran, G. R., & Hoag, M. R. (2017). The enzyme: renalase. Arch. Biochem. Biophys., 632, 66–76. DOI
- Wang, Y., Safirstein, R., Velazquez, H., Guo, X.-J., Hollander, L., Chang, J., Chen, T.-M., Mu, J.-J., & Desir, G. V. (2017). Extracellular renalase protects cells and organs by outside-in signalling. J. Cell. Mol. Med., 21(7), 1260–1265. DOI
- Kolodecik, T. R., Guo, X., Shugrue, C. A., Guo, X., Desir, G. V., Wen, L., & Gorelick, F. (2024). Renalase peptides reduce pancreatitis severity in mice. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 327(3), G466–G480. DOI
- Zhang, L., Zang, C.-S., Chen, B., Wang, Y., Xue, S., & Wu, M.-Y. (2023). Renalase regulates renal tubular injury in diabetic nephropathy via the p38MAPK signaling pathway. FASEB J., 37(10), e23188. DOI
- Fedchenko, V., Kopylov, A., Kozlova, N., Buneeva, O., Kaloshin, A., Zgoda, V., & Medvedev, A. (2016). Renalase secreted by human kidney HEK293T cells lacks its N-terminal peptide: implications for putative mechanisms of renalase action. Kidney Blood Press., 41(5), 593–603. DOI
- Kopylov, A. T., Fedchenko, V. I., Buneeva, O. A., Pyatakova, N. V., Zgoda, V. G., & Medvedev, A. E. (2018). A new method for quantitative determination of renalase based on mass spectrometric determination of a proteotypic peptide labelled with stable isotopes. Rapid Commun Mass Spectrom., 32(15), 1263- 1270. DOI
- Medvedev, A., Kopylov, A., Fedchenko, V., & Buneeva, O. (2020). Is renalase ready to become a biomarker of ischemia? Int. J. Cardiol., 307, 179. doi: 10.1016/j.ijcard.2019.09.045.
- Fedchenko, V. I., Kaloshin, A. A., Kaloshina, S. A., Buneeva, O. A., Kopylov, A. T., & Medvedev, A. E. (2025). Interaction of antirenalase antibodies with recombinant human renalases 1 and 2 and their C-terminal regions encoded by the alternative exons. Biomeditsinskaya Khimiya, 71(4), 283-287 DOI
- Fedchenko, V. I., Buneeva, O. A., Kaloshina, S. A., Kopylov, A. T., Medvedeva, M. V., & Medvedev, A. E. (2026). The use of antibodies to study cardiac renalase levels in the normotensive and hypertensive rats. Biomeditsinskaya Khimiya, 72(2), 112-117. DOI
- Fedchenko, V. I., & Kaloshin, A. A. (2019). A simplified method for obtaining cDNA of low-copy and silent eukaryotic genes using human renalase as an example. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 2(2), e00101. DOI
- Fedchenko, V., Kaloshin, A., & Medvedev, A. (2023). Improvement of the exon method for rapid synthesis of cDNA of the rat renaene. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 6(3), e00201. DOI
- Fedchenko, V., Kaloshin, A., & Medvedev, A. (2024). Generation of C-terminal sequences of human renalase-1 and renalase-2 encoded by alternative exons. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 7(2), e00228. DOI
- Fedchenko, V. I., Kaloshin, A. A., Mezhevikina, L. M., Buneeva, O. A., Medvedev, A. E. (2013). Construction of the coding sequence of the transcription variant 2 of the human renalase gene and its expression in the prokaryotic system. International Journal of Molecular Sciences, 14(6), 12764- 12779. DOI
- Scopes, R. K., & Stoter, A. (1982). Purification of all glycolytic enzymes from one muscle extract. Methods Enzymol., 90(Pt. E), 479-490. DOI
- Laemmli, U. K. (1970). Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 227(5259), 680-685. DOI
- Gallagher, S., Winston, S. E., Fuller, S. A., & Hurrell, J. G. (2008). Immunoblotting and immunodetection. Curr. Protoc. Mol. Biol., Chapter 10: Unit 10.8. DOI
- Fedchenko, V., Kaloshin, A., Kaloshina, S., & Medvedev, A. (2024). Interaction of mouse and sheep polyclonal antibodies with the main forms of human and rat renalase. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 7(4), e00248 DOI
- Protein Sequence Analysis. Retrieved 01.02.2026 from: nih.gov